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為了貫徹落實《醫(yī)療器械生產質量管理規(guī)范》及相關配套文件要求,加強北京市醫(yī)療器械生產科學監(jiān)管,指導和規(guī)范北京市醫(yī)療器械生產企業(yè)監(jiān)督檢查工作,幫助檢查人員增強對醫(yī)療器械無菌試驗的認識,明確對企業(yè)醫(yī)療器械無菌試驗的基本要求,北京市藥監(jiān)局結合相關法規(guī)及標準變化情況,以及北京市監(jiān)管工作實際,組織對《醫(yī)療器械無菌試驗檢查要點指南》(2010版)進行了修訂。32z上海啟微商務服務有限公司
一、修訂背景32z上海啟微商務服務有限公司
醫(yī)療器械無菌檢驗主要依據為《中華人民共和國藥典》(以下簡稱“藥典”),藥典現行有效版本為2020版,其中無菌檢驗相關內容較2010版有較大差異,為與藥典內容保持一致,同時參照相關管理規(guī)范和國行標的要求,修訂原有文件。32z上海啟微商務服務有限公司
二、修訂思路32z上海啟微商務服務有限公司
結合相關法規(guī)、標準要求的變化,以及北京市醫(yī)療器械無菌試驗監(jiān)管實際,對原指南有關內容進一步修改完善,有效落實醫(yī)療器械法規(guī)、標準要求,對北京市醫(yī)療器械無菌試驗相關監(jiān)管工作進行科學指導,全力提升科學監(jiān)管工作水平。32z上海啟微商務服務有限公司
三、主要修訂內容32z上海啟微商務服務有限公司
此次修訂,主要對以下內容進行了修改和完善:32z上海啟微商務服務有限公司
(一)無菌檢查有關要求32z上海啟微商務服務有限公司
根據相關標準,將無菌檢查環(huán)境潔凈度要求由“10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域”修改為“隔離器系統(tǒng)或B級背景下的A級單向流潔凈區(qū)域”;陽性對照管培養(yǎng)時間由“48~72小時”修改為“不超過5天”。32z上海啟微商務服務有限公司
(二)涉及培養(yǎng)基有關要求32z上海啟微商務服務有限公司
根據相關標準要求,針對培養(yǎng)基的種類、保存期、培養(yǎng)基制備及適用性檢查要求進行了修訂。如對培養(yǎng)基種類由“改良馬丁培養(yǎng)基”修改為“胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基”;對制備好的培養(yǎng)基增加了需進行保存期驗證的要求;刪除了改良馬丁培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的配制方法,增加了胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、胰酪大豆胨液體瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄液體培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基等的配制方法;硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的接菌種類由“金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌和生孢梭菌”修改為“金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和生孢梭菌”;胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(替代“改良馬丁培養(yǎng)基”)的接菌種類由“白色念珠菌和黑曲霉”修改為“枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉”等等。32z上海啟微商務服務有限公司
(三)無菌試驗培養(yǎng)及觀察32z上海啟微商務服務有限公司
試驗觀察要求由“逐日觀察”修改為“定期觀察”;對培養(yǎng)基出現渾濁后的后續(xù)轉種要求做了修改;對培養(yǎng)基制備記錄增加了需記錄滅菌后培養(yǎng)基pH值的要求;無菌試驗原始記錄中增加了需記錄所使用培養(yǎng)基批號的要求等。32z上海啟微商務服務有限公司
(四)方法適用性試驗32z上海啟微商務服務有限公司
硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的接菌種類由“金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌和生孢梭菌”修改為“金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和生孢梭菌”;胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(替代“改良馬丁培養(yǎng)基”)的接菌種類由“白色念珠菌和黑曲霉”修改為“枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉”。32z上海啟微商務服務有限公司
(五)供試品相關要求32z上海啟微商務服務有限公司
供試品數量由“應滿足同一批號3~11個單位供試品”修改為“應滿足標準中對于檢驗樣品數量的要求”,以滿足國標修訂的要求;檢驗量的定義由“一次試驗所用的供試品總量(g/mL)”修改為“供試品每個最小包裝接種至每份培養(yǎng)基的最小量”;按照2020版藥典重新修訂了“表1批出廠產品最少量檢驗數量”、“表2上市抽驗樣品的最少檢驗數量”和“表3供試品的最少檢驗量”的內容。32z上海啟微商務服務有限公司
(六)名詞解釋32z上海啟微商務服務有限公司
根據最新管理規(guī)范和國標要求,對常見的名詞解釋內容進行了修訂,并對正文中涉及到的關鍵術語增加了相應名詞解釋。32z上海啟微商務服務有限公司
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北京市醫(yī)療器械無菌試驗檢查32z上海啟微商務服務有限公司
要點指南(2023版)32z上海啟微商務服務有限公司
(征求意見稿)32z上海啟微商務服務有限公司
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無菌檢驗是無菌醫(yī)療器械產品生產控制過程中的一項重要內容。其檢驗方法、檢驗結果判定及檢驗人員業(yè)務能力等因素直接影響產品的質量和安全。作為無菌醫(yī)療器械生產企業(yè),其無菌檢驗工作應由本企業(yè)獨立完成。32z上海啟微商務服務有限公司
本指南旨在幫助北京市醫(yī)療器械生產監(jiān)管人員增強對無菌檢驗相關知識的認識,指導和規(guī)范全市醫(yī)療器械生產監(jiān)管人員對醫(yī)療器械生產企業(yè)無菌檢驗過程控制水平的監(jiān)督檢查工作,同時,為醫(yī)療器械生產企業(yè)(以下簡稱生產企業(yè))在無菌檢驗的過程管理要求提供參考和依據。32z上海啟微商務服務有限公司
本指南中引用的國家相關法規(guī)、規(guī)章、標準、檢查指南等版本發(fā)生變化時,要以執(zhí)行的最新版為準。必要時,北京市藥品監(jiān)督管理局應重新研究修訂,以確保本指南持續(xù)符合要求。32z上海啟微商務服務有限公司
一、適用范圍32z上海啟微商務服務有限公司
本檢查指南可作為北京市藥品監(jiān)督管理局組織、實施醫(yī)療器械注冊質量管理體系現場核查、《醫(yī)療器械生產許可證》現場核查、醫(yī)療器械生產監(jiān)督檢查等涉及無菌檢驗檢查的參考資料。32z上海啟微商務服務有限公司
二、檢查內容32z上海啟微商務服務有限公司
檢查人員應在充分了解生產企業(yè)無菌檢驗活動的情況下,對其無菌檢驗過程的控制水平進行客觀的檢查和評價。32z上海啟微商務服務有限公司
一般情況下,檢查人員可按照以下順序開展檢查工作,并適時做好相關記錄:32z上海啟微商務服務有限公司
1.了解產品特性及生產企業(yè)選擇的無菌檢驗方法。常見的產品無菌檢查法包括直接接種法和薄膜過濾法。當建立產品的無菌檢查方法時,生產企業(yè)應進行方法適用性試驗,以證明所采用的方法能夠給出正確的結果。若檢驗程序或產品發(fā)生變化可能影響檢驗結果時,應重新進行方法適用性試驗。方法適用性試驗應按供試品無菌檢查的規(guī)定及有關要求進行操作,若需使用表面活性劑、滅活劑、中和劑等試劑,應證明其有效性和對微生物無毒性。應對藥典規(guī)定的每一試驗菌應逐一進行方法確認。方法適用性試驗也可與供試品的無菌檢查同時進行。32z上海啟微商務服務有限公司
2.了解檢驗人員的專業(yè)背景、培訓情況及工作經歷?赏ㄟ^查看學歷證書、培訓證書或當面詢問檢驗人員的方式,檢查無菌檢驗人員是否具備微生物專業(yè)知識,并經過無菌技術的培訓。32z上海啟微商務服務有限公司
3.現場察看無菌實驗室。無菌檢查應在隔離器系統(tǒng)或B級背景下的A 級單向流潔凈區(qū)域中進行,A級和B級區(qū)域的空氣供給應通過終端高效空氣過濾器(HEP A)。其全過程必須嚴格遵守無菌操作,防止微生物污染。單向流空氣區(qū)、工作臺面及環(huán)境應定期監(jiān)測。32z上海啟微商務服務有限公司
4.現場察看無菌試驗所需的設備和器具。其中,主要設備包括:恒溫培養(yǎng)箱(真菌、細菌)和(或)恒溫水浴箱、壓力蒸汽滅菌器和(或)電熱干燥箱、電子天平、光學顯微鏡、集菌儀、過濾裝置(無油真空泵、濾杯、濾頭、濾瓶、微孔濾膜、夾子)等;從試驗安全性考慮,建議陽性對照試驗使用生物安全柜。32z上海啟微商務服務有限公司
主要器具有:試管及試管架、酒精燈、75%乙醇棉、滅菌刻度吸管(1mL)、滅菌平皿(9cm)、錐形瓶、三角燒瓶、滅菌剪刀、鑷子等。32z上海啟微商務服務有限公司
生產企業(yè)應采用可靠方法對與供試液接觸的所有器具滅菌,通常置壓力蒸汽滅菌器內121℃、30分鐘,或置電熱干燥箱內160℃、2小時。器具滅菌后必須做好標識,標明滅菌的時間和使用有效期。器皿在滅菌后,最多1周即用完。32z上海啟微商務服務有限公司
5.對照生產企業(yè)有關無菌試驗的管理制度、操作規(guī)程等相關技術文件,要求檢驗人員當場操作或口述無菌檢驗的過程。32z上海啟微商務服務有限公司
(1)培養(yǎng)基制備32z上海啟微商務服務有限公司
生產企業(yè)可按藥典中的處方制備培養(yǎng)基,亦可使用按該處方生產的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。配制后應采用驗證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基應保存在2℃~25℃、避光的環(huán)境,并在經驗證的保存期內使用。32z上海啟微商務服務有限公司
生產企業(yè)也可以使用商品化的預制培養(yǎng)基,應在規(guī)定的有效期內使用。32z上海啟微商務服務有限公司
無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基等應符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。檢查可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時進行。32z上海啟微商務服務有限公司
(2)供試品的無菌檢查32z上海啟微商務服務有限公司
無菌檢查法包括薄膜過濾法和直接接種法。只要供試品性狀允許,應采用薄膜過濾法。供試品無菌檢查所采用的檢查方法和檢驗條件應與方法適用性試驗確認的方法相同。32z上海啟微商務服務有限公司
無菌操作時,如果供試品容器內有一定的真空度,可用適宜的無菌器材(如帶有除菌過濾器的針頭)向容器內導入無菌空氣,再按無菌操作啟開容器取出內容物。32z上海啟微商務服務有限公司
(3)培養(yǎng)及觀察32z上海啟微商務服務有限公司
含培養(yǎng)基的容器按規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天。培養(yǎng)期間應定期觀察并記錄是否有菌生長。如在加入供試品后、或在培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)基出現渾濁,培養(yǎng)14天后,不能從外觀上判斷有無微生物生長,可取該培養(yǎng)液不少于1mL轉種至同種新鮮培養(yǎng)基中,將原始培養(yǎng)物和新接種的培養(yǎng)物繼續(xù)培養(yǎng)不少于4天,觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現渾濁;或取培養(yǎng)液涂片,染色,鏡檢,判斷是否有菌。32z上海啟微商務服務有限公司
(4)結果判斷32z上海啟微商務服務有限公司
生產企業(yè)應按照如下標準進行判斷:32z上海啟微商務服務有限公司
①若供試品管均澄清,或雖顯渾濁但經確證無菌生長,判供試品符合規(guī)定;②若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長,判供試品不符合規(guī)定,除非能充分證明試驗結果無效,即生長的微生物非供試品所含。陽性對照管應生長良好,陰性對照管不得有菌生長,否則試驗無效。32z上海啟微商務服務有限公司
當符合下列至少一個條件時,方可判試驗結果無效:①無菌檢查試驗所用的設備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結果不符合無菌檢查法的要求;②回顧無菌試驗過程,發(fā)現有可能引起微生物污染的因素;③供試品管中生長的微生物經鑒定后,確證是因無菌試驗中所使用的物品和(或)無菌操作技術不當引起的。32z上海啟微商務服務有限公司
試驗若經確認無效,應重試。重試時,重新取同量供試品,依法重試,若無菌生長,判供試品符合規(guī)定;若有菌生長,判供試品不符合規(guī)定。32z上海啟微商務服務有限公司
6.查閱試驗記錄。完整的試驗記錄應明確包含下列幾類信息: 32z上海啟微商務服務有限公司
(1)樣品記錄,至少應包括:取樣日期、樣品名稱、樣品規(guī)格、樣品批號、取樣地點、取樣方式、取樣人、原始試驗記錄序號。32z上海啟微商務服務有限公司
(2)滅菌物品制備記錄32z上海啟微商務服務有限公司
①培養(yǎng)基:培養(yǎng)基名稱、培養(yǎng)基批號、各組分的稱取量(g)、蒸餾水用量(mL)、培養(yǎng)基分裝數量、滅菌日期、滅菌的實際溫度和時間、滅菌后pH值(冷卻至25℃測定,不得超過規(guī)定值的±0.2)、制備人、培養(yǎng)基存放地點和有效期等。32z上海啟微商務服務有限公司
②器具:器具名稱、器具數量、滅菌日期、滅菌的實際溫度和時間、制備人、器具存放地點、有效期等。32z上海啟微商務服務有限公司
(3)原始試驗記錄,至少應包括:記錄名稱、記錄序號、樣品名稱、樣品規(guī)格、樣品批號、滅菌批號、樣品數量、取樣日期、檢驗日期、檢驗依據、主要試驗設備及器具、使用的培養(yǎng)基批號、試驗方法、試驗環(huán)境條件、試驗結果(定期觀察的結果)、試驗結論、檢測人、復核人等。32z上海啟微商務服務有限公司
(4)廢棄物處理記錄,至少應包括:廢棄物形態(tài)(固體、液體)、廢棄物數量、滅菌時間和溫度、經辦人、處理日期等。32z上海啟微商務服務有限公司
三、其它應注意的問題32z上海啟微商務服務有限公司
1.生產企業(yè)應確保樣品具有代表性:試驗樣品應從常規(guī)產品中能夠代表加工過程和條件的批中選擇。選擇樣品是隨機的。試驗樣品的選擇和試驗前預處理方式應明確,以免對樣品上所含的微生物的數量和種類造成污染和改變。試驗樣品可以選擇制造過程中的不合格產品,它們應該代表這個生產批的加工程序和條件。用于試驗的不合格產品應不會影響無菌測試的有效性。32z上海啟微商務服務有限公司
2.生產企業(yè)對于供試品的選取、轉移過程要采取防止污染措施,確保試驗結果的可靠性。選取制作供試品的試驗樣品時,樣品包裝須完好無損,尤其是只有一層包裝的樣品。進入無菌檢驗室的樣品若有兩層(或兩層以上)包裝的,需將外包裝在傳遞窗(或緩沖間)拆除后,傳入實驗室。32z上海啟微商務服務有限公司
3.無菌檢驗中接觸供試品的試驗用具溫度不能過高,以防供試品上可能存在的微生物因溫度過高被滅活。對不同種類和不同批次的產品,在拆包裝及夾取樣品時,應更換試驗用具(如:剪刀、鑷子)。32z上海啟微商務服務有限公司
4.進入無菌操作室的所有培養(yǎng)基、供試品等的外表都應采用適用的方法進行消毒處理(如:紫外燈照射不少于30分鐘;適用時,對供試品外包裝表面用適宜的消毒液進行徹底消毒等),以避免將外包裝污染的微生物帶入無菌檢驗室。出具試驗結果后,所有培養(yǎng)物須經121℃高壓滅菌30分鐘的處理。32z上海啟微商務服務有限公司
5.由于無菌檢驗時間跨度較長,因此記錄應能夠完整體現試驗的全過程,對于在試驗過程中出現的各種情況,均應在記錄中客觀反映。32z上海啟微商務服務有限公司
6. 在進行無菌檢驗時,還應考慮消除產生假陰性的因素。產生假陰性的因素以及相應的消除措施包括:培養(yǎng)條件不能支持微生物的生長,應按照藥典要去進行培養(yǎng)基適用性檢查;產品中含有某種抑菌成分會導致微生物生長微弱、緩慢或不生長,可采用增加沖洗量、增加培養(yǎng)基用量、使用中和劑或滅活劑等方式消除抑菌物質的影響;產品滅菌后未進行充分的解析(如采用環(huán)氧乙烷滅菌)導致微生物被殺死,應確定滅菌后產品的解析時間、儲存條件及儲存時間。32z上海啟微商務服務有限公司
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參考資料一:32z上海啟微商務服務有限公司
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常見的名詞解釋32z上海啟微商務服務有限公司
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1.滅菌:經確認的使產品無存活微生物的過程。目前國際上規(guī)定,滅菌過程必須使物品污染微生物存活概率減少到10-6及以下。32z上海啟微商務服務有限公司
2.微生物:在顯微鏡下才能看到的微小實體,包括細菌、真菌、原生動物和病毒。32z上海啟微商務服務有限公司
3.無菌技術:是指在微生物試驗工作中,控制或防止各類微生物的污染及其干擾的一系列操作方法和有關措施,其中包括無菌環(huán)境設施、無菌試驗器材以及無菌操作。32z上海啟微商務服務有限公司
4.無菌操作:是指在無菌環(huán)境條件下,在對無菌制品或無菌器械進行檢驗的過程中,能防止微生物污染與干擾的一種常規(guī)操作方法。32z上海啟微商務服務有限公司
5.培養(yǎng)條件:促進微生物復蘇、生長和(或)繁殖所采用的生長培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法的組合,培養(yǎng)方法可包括溫度、時間和其他規(guī)定用于培養(yǎng)的條件。32z上海啟微商務服務有限公司
6.需氧微生物:需要氧氣進行代謝的微生物。32z上海啟微商務服務有限公司
7.厭氧微生物:不需要氧氣進行代謝的微生物。32z上海啟微商務服務有限公司
8.抑細菌/抑霉菌試驗:用選定的微生物來演示某些物質的存在能夠抑制這些微生物的繁殖。32z上海啟微商務服務有限公司
9.促生長試驗:為了證明一種培養(yǎng)基能夠支持微生物繁殖而進行的技術操作。32z上海啟微商務服務有限公司
10.假陰性:實際陽性的無菌試驗結果被變成了陰性。32z上海啟微商務服務有限公司
11.假陽性:實際陰性的無菌試驗結果被變成了陽性。32z上海啟微商務服務有限公司
12.生物指示物:對規(guī)定的滅菌過程有特定的抗力,含有活微生物的測試系統(tǒng)。32z上海啟微商務服務有限公司
13.化學指示物:根據暴露于某一滅菌過程所產生的化學或物理變化,顯現一個或多個預定過程變量變化的測試系統(tǒng)。32z上海啟微商務服務有限公司
14.無菌保證水平(SAL):滅菌后產品上存在單個活微生物的概率。32z上海啟微商務服務有限公司
15.表面活性劑:改變溶液表面能(表面張力)的成分。32z上海啟微商務服務有限公司
16.中和劑:有抑菌成分中和能力的化學有效成分。32z上海啟微商務服務有限公司
17.滅活劑:對抑菌成分有滅活能力的化學有效成分。32z上海啟微商務服務有限公司
18.潔凈區(qū):需要對環(huán)境中塵粒及微生物數量進行控制的房間(區(qū)域),其建筑結構、裝備及其使用應當能夠減少該區(qū)域內污染物的引入、產生和滯留。32z上海啟微商務服務有限公司
19. A級潔凈區(qū):高風險操作區(qū),如灌裝區(qū)、放置膠塞桶和與無菌制劑直接接觸的敞口包裝容器的區(qū)域及無菌裝配或連接操作的區(qū)域,應當用單向流操作臺(罩)維持該區(qū)的環(huán)境狀態(tài)。單向流系統(tǒng)在其工作區(qū)域必須均勻送風,風速為0.36-0.54m/s(指導值)。應當有數據證明單向流的狀態(tài)并經過驗證。在密閉的隔離操作器或手套箱內,可使用較低的風速。B級潔凈區(qū):指無菌配制和灌裝等高風險操作A級潔凈區(qū)所處的背景區(qū)域。32z上海啟微商務服務有限公司
各級別空氣懸浮粒子的標準規(guī)定如下表:32z上海啟微商務服務有限公司
潔凈度級別32z上海啟微商務服務有限公司
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懸浮粒子最大允許數/立方米32z上海啟微商務服務有限公司
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靜態(tài)32z上海啟微商務服務有限公司
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動態(tài)32z上海啟微商務服務有限公司
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≥0.5μm32z上海啟微商務服務有限公司
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≥5.0μm32z上海啟微商務服務有限公司
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≥0.5μm32z上海啟微商務服務有限公司
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≥5.0μm32z上海啟微商務服務有限公司
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A級32z上海啟微商務服務有限公司
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352032z上海啟微商務服務有限公司
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2032z上海啟微商務服務有限公司
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352032z上海啟微商務服務有限公司
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2032z上海啟微商務服務有限公司
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B級32z上海啟微商務服務有限公司
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352032z上海啟微商務服務有限公司
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2932z上海啟微商務服務有限公司
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35200032z上海啟微商務服務有限公司
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290032z上海啟微商務服務有限公司
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參考資料二:32z上海啟微商務服務有限公司
供試品數量的選擇32z上海啟微商務服務有限公司
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檢驗數量是指一次試驗所用供試品最小包裝容器的數量,成品每亞批均應進行無菌檢查。除另有規(guī)定外,出廠產品按中國藥典2020版四部通則1101中表1規(guī)定,上市產品監(jiān)督檢驗按表2規(guī)定。表1、表2中最少檢驗數量不包括陽性對照試驗的供試品用量。執(zhí)行GB/T 14233.2的供試品數量應滿足標準中對于檢驗樣品數量的要求。32z上海啟微商務服務有限公司
檢驗量是指供試品每個最小包裝接種至每份培養(yǎng)基的最小量。除另有規(guī)定外,每份培養(yǎng)基接種的供試品量按中國藥典2020版四部通則1101中表3規(guī)定。若每支(瓶)供試品的裝量按規(guī)定足夠接種兩份培養(yǎng)基,則應分別接種硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。采用薄膜過濾法時,只要供試品特性允許,應將所有容器內的全部內容物過濾。32z上海啟微商務服務有限公司
表1 批出廠產品最少量檢驗數量32z上海啟微商務服務有限公司
供試品32z上海啟微商務服務有限公司
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批產量N(個)32z上海啟微商務服務有限公司
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接種每種培養(yǎng)基的最少檢驗數量32z上海啟微商務服務有限公司
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注射劑32z上海啟微商務服務有限公司
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≤10032z上海啟微商務服務有限公司
100<N≤50032z上海啟微商務服務有限公司
>50032z上海啟微商務服務有限公司
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10%或4個(取較多者)32z上海啟微商務服務有限公司
10個32z上海啟微商務服務有限公司
2%或20個(取較少者)32z上海啟微商務服務有限公司
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大體積注射劑(>100mL)32z上海啟微商務服務有限公司
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32z上海啟微商務服務有限公司
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2%或10個(取較少者)32z上海啟微商務服務有限公司
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眼用及其他非注射產品32z上海啟微商務服務有限公司
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≤20032z上海啟微商務服務有限公司
>20032z上海啟微商務服務有限公司
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5%或2個(取較多者)32z上海啟微商務服務有限公司
10個32z上海啟微商務服務有限公司
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桶裝無菌固體原料32z上海啟微商務服務有限公司
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≤432z上海啟微商務服務有限公司
4<N≤5032z上海啟微商務服務有限公司
>5032z上海啟微商務服務有限公司
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每個容器32z上海啟微商務服務有限公司
20%或4個容器(取較多者)32z上海啟微商務服務有限公司
2%或10個容器(取較多者)32z上海啟微商務服務有限公司
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醫(yī)療器械32z上海啟微商務服務有限公司
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≤10032z上海啟微商務服務有限公司
100<N≤500 32z上海啟微商務服務有限公司
>500 32z上海啟微商務服務有限公司
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10%或4件(取較多者)32z上海啟微商務服務有限公司
10件32z上海啟微商務服務有限公司
2%或20件(取較少者)32z上海啟微商務服務有限公司
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注:若每個容器中的裝量不足接種兩種培養(yǎng)基,那么表中最少檢驗數量應增加相應倍數。32z上海啟微商務服務有限公司
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表2 上市抽驗樣品的最少檢驗數量32z上海啟微商務服務有限公司
供試品32z上海啟微商務服務有限公司
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供試品最少檢驗數量32z上海啟微商務服務有限公司
(瓶或支)32z上海啟微商務服務有限公司
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液體制劑32z上海啟微商務服務有限公司
固體制劑32z上海啟微商務服務有限公司
血液制品V<50mL32z上海啟微商務服務有限公司
V≥50mL32z上海啟微商務服務有限公司
醫(yī)療器械32z上海啟微商務服務有限公司
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1032z上海啟微商務服務有限公司
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632z上海啟微商務服務有限公司
232z上海啟微商務服務有限公司
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注:1.若每個容器中的裝量不足接種兩種培養(yǎng)基,那么表中的最少檢驗數量應加倍增加相應倍數。32z上海啟微商務服務有限公司
2.桶裝固體原料的最少檢驗數量為4個包裝。32z上海啟微商務服務有限公司
表3 供試品的最少檢驗量32z上海啟微商務服務有限公司
供試品32z上海啟微商務服務有限公司
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供試品裝量32z上海啟微商務服務有限公司
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每支樣品接入每種培養(yǎng)基的最少量32z上海啟微商務服務有限公司
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液體制劑32z上海啟微商務服務有限公司
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V<1mL32z上海啟微商務服務有限公司
1mL≤V≤40mL32z上海啟微商務服務有限公司
40mL<V≤100mL32z上海啟微商務服務有限公司
V>100mL32z上海啟微商務服務有限公司
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全量32z上海啟微商務服務有限公司
半量,但不得少于1mL32z上海啟微商務服務有限公司
20mL32z上海啟微商務服務有限公司
10%,但不得少于20 mL32z上海啟微商務服務有限公司
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固體制劑32z上海啟微商務服務有限公司
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M<50mg32z上海啟微商務服務有限公司
50mg≤M<300mg32z上海啟微商務服務有限公司
300mg≤M≤5g32z上海啟微商務服務有限公司
M>5g32z上海啟微商務服務有限公司
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全量32z上海啟微商務服務有限公司
半量,但不得少于50mg32z上海啟微商務服務有限公司
150mg32z上海啟微商務服務有限公司
500mg32z上海啟微商務服務有限公司
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醫(yī)療器械32z上海啟微商務服務有限公司
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外科用敷料棉花及紗布32z上海啟微商務服務有限公司
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取100mg或1cm×3cm32z上海啟微商務服務有限公司
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縫合線、一次性醫(yī)用材料32z上海啟微商務服務有限公司
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整個材料①32z上海啟微商務服務有限公司
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帶導管的一次性醫(yī)療器械(如輸液袋)32z上海啟微商務服務有限公司
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二分之一內表面積32z上海啟微商務服務有限公司
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其他醫(yī)療器械32z上海啟微商務服務有限公司
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整個器具①(切碎或拆散開)32z上海啟微商務服務有限公司
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注:①如果醫(yī)療器械體積過大培養(yǎng)及用量可在2000mL以上,將其完全浸沒。32z上海啟微商務服務有限公司
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參考資料三:32z上海啟微商務服務有限公司
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培養(yǎng)基的制備32z上海啟微商務服務有限公司
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培養(yǎng)應注意培養(yǎng)條件:硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 (30~35)℃14天;胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 (20~25)℃14天。選擇培養(yǎng)條件需考慮的因素:產品的性質、制造方法、潛在的微生物污染來源、可能遇到的微生物種類。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基必須在煮沸后,再進行分裝、滅菌。32z上海啟微商務服務有限公司
1.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基32z上海啟微商務服務有限公司
胰酪胨 15.0g、酵母浸出粉 5.0g、葡萄糖/無水葡萄糖 5.5g/5.0g、氯化鈉 2.5g、L-胱氨酸 0.5g、新配制的0.1%刃天青溶液 1.0 mL、硫乙醇酸鈉 0.5g(或硫乙醇酸 0.3mL)、瓊脂 0.75g、水 1000 mL32z上海啟微商務服務有限公司
除葡萄糖和刃天青溶液外,取上述成分混合,微溫溶解,調節(jié)pH為弱堿性,煮沸,濾清,加入葡萄糖和刃天青溶液,搖勻,調節(jié)pH,使滅菌后在25℃的pH值為7.1±0.2。分裝至適宜的容器中,其裝量與容器高度的比例應符合培養(yǎng)結束后培養(yǎng)基氧化層(粉紅色)不超過培養(yǎng)基深度的 1/2。滅菌。在供試品接種前,培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過培養(yǎng)基深度的1/3 ,否則,須經 100℃水浴加熱至粉紅色消失(不超過 20 分鐘),迅速冷卻,只限加熱一次,并防止被污染。32z上海啟微商務服務有限公司
除另有規(guī)定外,硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置 (30~35)℃培養(yǎng)。32z上海啟微商務服務有限公司
2.胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基32z上海啟微商務服務有限公司
胰酪胨 17.0g、氯化鈉 5.0g、大豆木瓜蛋白酶水解物 3.0g、磷酸氫二鉀 2.5g、葡萄糖/無水葡萄糖 2.5g/2.3g、水 1000 mL32z上海啟微商務服務有限公司
除葡萄糖外,取上述成分,混合,微溫溶解,濾過,調節(jié)pH使滅菌后在25℃的pH值為7.3±0.2,加入葡萄糖,分裝,滅菌。32z上海啟微商務服務有限公司
胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基置(20~25)℃培養(yǎng)。32z上海啟微商務服務有限公司
3.中和或滅活用培養(yǎng)基32z上海啟微商務服務有限公司
按上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的處方及制法,在培養(yǎng)基滅菌或使用前加入適宜的中和劑、滅活劑或表面活性劑,其用量同方法適用性試驗。32z上海啟微商務服務有限公司
4.0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基(用于硫酸鏈霉素等抗生素的無菌檢查)32z上海啟微商務服務有限公司
胨 10.0g、氯化鈉 5.0g、牛肉浸出粉 3.0g、葡萄糖 5.0g、水 1000 mL32z上海啟微商務服務有限公司
除葡萄糖外,取上述成分混合,微溫溶解,調節(jié)pH為弱堿性,煮沸,加入葡萄糖溶解后,搖勻,濾清,調節(jié)pH使滅菌后在25℃的pH值為 7.2±0.2,分裝,滅菌。32z上海啟微商務服務有限公司
5.胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基32z上海啟微商務服務有限公司
胰酪胨 15.0g、氯化鈉 5.0g、大豆木瓜蛋白酶水解物 5.0g、瓊脂 15.0g、水1000 mL32z上海啟微商務服務有限公司
除瓊脂外,取上述成分,混合,微溫溶解,調節(jié)pH使滅菌后在25℃的pH值為7.3±0.2,加入瓊脂,加熱溶化后,搖勻,分裝,滅菌。32z上海啟微商務服務有限公司
6.沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基32z上海啟微商務服務有限公司
動物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g、葡萄糖 20.0g、水 1000 mL32z上海啟微商務服務有限公司
除葡萄糖外,取上述成分,混合,微溫溶解,調節(jié)pH使滅菌后在25℃的pH值為5.6±0.2,加入葡萄糖,搖勻,分裝,滅菌。32z上海啟微商務服務有限公司
7.沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基32z上海啟微商務服務有限公司
動物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g、瓊脂15.0g、葡萄糖 40.0g、水 1000 mL32z上海啟微商務服務有限公司
除葡萄糖、瓊脂外,取上述成分,混合,微溫溶解,調節(jié)pH使滅菌后在25℃的pH值為5.6±0.2,加入瓊脂,加熱溶化后,再加入葡萄糖,搖勻,分裝,滅菌。32z上海啟微商務服務有限公司
8.馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)32z上海啟微商務服務有限公司
馬鈴薯(去皮) 200g、瓊脂 14.0g、葡萄糖 20.0g、水 1000 mL32z上海啟微商務服務有限公司
取馬鈴薯,切成小塊,加水1000 mL,煮沸20~30分鐘,用6~8層紗布過濾,取濾液補水至1000 mL,調節(jié)pH使滅菌后在25℃的pH值為5.6±0.2,加入瓊脂,加熱溶化后,再加入葡萄糖,搖勻,分裝,滅菌。
參考資料四:32z上海啟微商務服務有限公司
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培養(yǎng)基的適用性檢查32z上海啟微商務服務有限公司
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1.無菌性檢查32z上海啟微商務服務有限公司
每批培養(yǎng)基一般隨機取不少于5支(瓶),置各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天,應無菌生長。32z上海啟微商務服務有限公司
2.靈敏度檢查32z上海啟微商務服務有限公司
菌種:培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數不得超過5代(從菌種保存中心獲得的干燥菌種為第0代),并采用適宜的菌種保藏技術進行保存和確認,以保證試驗菌株的生物學特性。32z上海啟微商務服務有限公司
金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B)26 003]銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10 104]枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63 501]生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B)64 941]白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98 001]黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F)98 003]32z上海啟微商務服務有限公司
3.菌液制備32z上海啟微商務服務有限公司
接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上,接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中,(30~35)℃培養(yǎng)18~24小時;接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上,(20~25)℃培養(yǎng)2~3天,上述培養(yǎng)物用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度菌懸液。32z上海啟微商務服務有限公司
接種黑曲霉至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上,(20~25)℃培養(yǎng)5~7天或直到獲得豐富的孢子,加入適量含0.05%(mL/mL)聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或含0.05%(mL/mL)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液,將孢子洗脫。然后,采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內,用含0.05%(mL/mL)聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或含0.05%(mL/mL)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的孢子懸液。32z上海啟微商務服務有限公司
菌懸液若在室溫下放置,一般應在2小時內使用,若保存在(2~8)℃可在24小時內使用。黑曲霉孢子懸液可保存在(2~8)℃,在驗證過的貯存期內使用。32z上海啟微商務服務有限公司
4.培養(yǎng)基接種 32z上海啟微商務服務有限公司
取適宜裝量的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7支,分別接種不大于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2支,另1支不接種作為空白對照;取適宜裝量的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7支,分別接種不大于100cfu 的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支,另1支不接種作為空白對照。接種細菌的培養(yǎng)管培養(yǎng)時間不超過3天,接種真菌的培養(yǎng)管培養(yǎng)時間不得超過5天。32z上海啟微商務服務有限公司
5.結果判定32z上海啟微商務服務有限公司
空白對照管應無菌生長,若加菌的培養(yǎng)基管均生長良好,判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。32z上海啟微商務服務有限公司
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參考資料五:32z上海啟微商務服務有限公司
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方法適用性試驗32z上海啟微商務服務有限公司
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1.菌種及菌液制備32z上海啟微商務服務有限公司
金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉的菌株及菌液制備同培養(yǎng)基靈敏度檢查。大腸埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B)44102]的菌液制備同金黃色葡萄球菌。32z上海啟微商務服務有限公司
2.薄膜過濾法32z上海啟微商務服務有限公司
按供試品的無菌檢查要求,取每種培養(yǎng)基規(guī)定接種的供試品總量,采用薄膜過濾法過濾,沖洗,在最后一次的沖洗液中加入不大于100cfu的試驗菌,過濾。加培養(yǎng)基至濾筒內,接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌的濾筒內加硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基;接種枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉的濾筒內加胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。另取一裝有同體積培養(yǎng)基的容器,加入等量試驗菌,作為對照。置規(guī)定溫度培養(yǎng),培養(yǎng)時間不得超過5天。32z上海啟微商務服務有限公司
3.直接接種法32z上海啟微商務服務有限公司
取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基6管,分別接入不大于100cfu的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌各2管,取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基6管,分別接入不大于100cfu的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管按供試品的無菌檢查要求,接入每支培養(yǎng)基規(guī)定的供試品接種量,另1管作為對照,置規(guī)定的溫度培養(yǎng),培養(yǎng)時間不得超過5天。32z上海啟微商務服務有限公司
4.結果判斷32z上海啟微商務服務有限公司
與對照管比較,如含供試品各容器中的試驗菌均生長良好,則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計,照此檢查方法和檢查條件進行供試品的無菌檢查。如含供試品的任一容器中的試驗菌生長微弱、緩慢或不生長,則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下有抑菌作用,可采用增加沖洗量、增加培養(yǎng)基的用量、使用中和劑或滅活劑、更換濾膜品種等方法,消除供試品的抑菌作用,并重新進行方法適用性試驗。32z上海啟微商務服務有限公司
方法適用性試驗也可與供試品的無菌檢查同時進行。32z上海啟微商務服務有限公司
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參考資料六:32z上海啟微商務服務有限公司
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供試品處理及接種培養(yǎng)基32z上海啟微商務服務有限公司
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直接接種法:每個供試品按規(guī)定量分別接種至各含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的容器中。除另有規(guī)定外,每個容器中培養(yǎng)基的用量應符合接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的10%,同時,硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于15mL,胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基每管裝量不少于10mL。32z上海啟微商務服務有限公司
薄膜過濾法:將供試液混勻,過濾。如供試品具有抑菌作用或含防腐劑,須用適量的沖洗液沖洗濾膜,沖洗次數不得少于三次。沖洗后,如用封閉式薄膜過濾器,分別將100mL硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基加入相應的濾筒內。32z上海啟微商務服務有限公司
薄膜過濾法應優(yōu)先采用封閉式薄膜過濾器,無菌檢查用的濾膜孔徑應不大于0.45μm。直徑約為50mm。根據供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質。根據供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質。使用時,應保證濾膜在過濾前后的完整性。32z上海啟微商務服務有限公司
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參考資料七:32z上海啟微商務服務有限公司
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對照試驗32z上海啟微商務服務有限公司
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1.陽性對照:陽性對照應根據供試品特性選擇陽性對照菌:無抑菌作用及抗革蘭陽性菌為主的供試品,以金黃色葡萄球菌為對照菌;抗革蘭陰性菌為主的供試品以大腸埃希菌為對照菌;抗厭氧菌的供試品,以生孢梭菌為對照菌;抗真菌的供試品,以白色念珠菌為對照菌。陽性對照試驗的菌液制備同方法驗證試驗,加菌量小于100cfu,供試品用量同供試品無菌檢查每份培養(yǎng)基接種的樣品量。陽性對照管培養(yǎng)不超過5天應生長良好。32z上海啟微商務服務有限公司
2.陰性對照:供試品無菌檢查時,應取相應溶劑和稀釋液、沖洗液同法操作,作為陰性對照。陰性對照不得有菌生長。32z上海啟微商務服務有限公司
3.稀釋液、沖洗液及其制備方法32z上海啟微商務服務有限公司
稀釋液、沖洗液配制后應采用驗證合格的滅菌程序滅菌。32z上海啟微商務服務有限公司
(1)0.1%無菌蛋白胨水溶液 取蛋白胨1.0g,加水1000mL,微溫溶解,必要時濾過使澄清,調節(jié)pH值至7.1±0.2,分裝,滅菌。32z上海啟微商務服務有限公司
(2)pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液 取磷酸二氫鉀3.56g,無水磷酸氫二鈉5.77g,氯化鈉4.30g,蛋白胨1.0g,加水1000mL,微溫溶解,必要時濾過使澄清,分裝,滅菌。32z上海啟微商務服務有限公司
(3)根據供試品的特性,可選用其他經驗證過的適宜的溶液作為稀釋液、沖洗液。(如0.9%無菌氯化鈉溶液)32z上海啟微商務服務有限公司
如需要,可在上述稀釋液或沖洗液的滅菌前或滅菌后加入表面活性劑或中和劑等。32z上海啟微商務服務有限公司
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參考資料八:32z上海啟微商務服務有限公司
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參考資料32z上海啟微商務服務有限公司
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——《中華人民共和國藥典》32z上海啟微商務服務有限公司
——GB/T 14233.2《醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗方法 第2部分生物學試驗方法》32z上海啟微商務服務有限公司
——GB 19489《實驗室 生物安全通用要求》32z上海啟微商務服務有限公司
——GB 50346《生物安全實驗室建筑技術規(guī)范》32z上海啟微商務服務有限公司
——GB/T 16292~16294《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子的測試方法》、《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))浮游菌的測試方法》、《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))沉降菌的測試方法》32z上海啟微商務服務有限公司
——GB/T 19971《醫(yī)療保健產品滅菌 術語》32z上海啟微商務服務有限公司
——GB/T 19973.2《醫(yī)療器械的滅菌 微生物學方法 第2部分:用于滅菌過程的定義、確認和維護的無菌試驗》32z上海啟微商務服務有限公司
——《藥品生產質量管理規(guī)范》附錄1 無菌藥品32z上海啟微商務服務有限公司
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